磺化Cy7.5是一种发近红外(NIR)荧光的花青素类荧光染料。磺化Cy7.5是磺化修饰过的Cy7.5,水溶性好。磺化Cy7.5的消光系数高,荧光也很亮,并且对pH不敏感,并且由于它的荧光波长(Em:797nm)恰好处于肌体组织近红外窗口I的区域(肌体的血液,体液和组织此区域背景荧光弱,而长波长穿透性强),所以磺化Cy7.5常应用于小动物活体体内成像中。磺化Cy7.5-NHS可以用来标记蛋白,抗体,多肽,核酸分子等。由于强水溶性加带电荷,磺化花青素标记的生物分子更稳定,不易产生疏水性聚集。
NHS活化酯(N-羟基琥珀酰亚胺酯,N-hydroxysuccinimide ester,succinimidyl ester)是生物标记反应中最常用的活化基团。它活化Cy7.5分子中的羧基,让它可以和目标生物分子上的胺基(伯胺或者仲胺)反应生成稳定的酰胺键,从而把磺化Cy7.5分子标记到生物大分子上。由于游离胺基是蛋白,抗体,多肽表面的常见官能团(来自于赖胺酸侧链),磺化Cy7.5-NHS可以和它们直接反应。核酸分子中天然不带游离胺基,只有胺基修饰过的RNA或者DNA才可以和磺化Cy7.5-NHS反应。
磺化Cy7.5-NHS活化酯的水溶性非常好,所以可以在水相的标记反应体系中直接使用,不需要有机溶剂助溶,特别适合标记蛋白等对有机溶剂敏感的生物分子。另外磺化Cy7.5水溶性极好,并且染料分子本身带电荷,标记到蛋白表面后不会引发疏水性蛋白聚集,提高荧光标记产物的稳定性。磺化Cy7.5-NHS也溶于甲醇,DMSO,DMF等有机溶剂,标记反应也可以在纯有机溶剂中进行。如需脂溶性Cy7.5染料,可选择普通花青素,即Cy7.5-NHS活化酯。
磺化Cy7.5-NHS标记后的产物Ex/Em是778/797nm。和它具有相似荧光特性的染料包括Alexa Fluor 790,DyLight 800,吲哚菁绿(ICG)等。
分子式 | C47H46K3N3O16S4 |
分子量 | 1154.43 |
结构式 | |
光谱特性 | Ex/Em=778/797nm |
消光系数 | 222000L·mol-1·cm-1 |
量子产率 | 0.21 |
外观 | 深绿色固体 |
溶解性 | 易溶于甲醇,DMF等有机溶剂,极易溶于水 |
保存条件 | 避光,干燥,-20℃保存 |
- NHS ester基团对湿度比较敏感,务必干燥保存产品。使用前产品需放到室温回温至少20分钟。
- 使用不含氨基的缓冲体系。比如磷酸钠缓冲液(PBS),Hepes缓冲液,碳酸氢钠缓冲液;或硼酸缓冲液等。不要使用任何含伯胺或仲胺的缓冲液,比如Tris,甘氨酸等。高浓度咪唑也会影响反应。
- 标记反应不要放在强光下,因为大部分荧光化合物在强光下长时间照射会缓慢漂白。
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